一、实验准备

　　（1）仪器：净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱

　　（2）玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、培养瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、废液缸

　　（3）塑料器皿：吸头、枪头、胶塞、移液管（10ml）、15ml离心管、冻存管（1～2ml）

　　（4）其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪

　　（5）试剂：PBS、小牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%）

　　二、操作步骤

　　（1）从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

　　（2）从37℃水浴中取出冻存管，75％酒精消毒后，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管中。PriCells推荐接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

　　（3）离心，1000rpm，5min。PriCells推荐不离心。

　　（4）弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。PriCells推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。

　　（5）次日更换一次1／2培养液，继续培养。

　　三、注意事项

　　（1）将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。

　　（2）取出冻存管后立即放入水浴中，使其尽快融化（在1－2分钟内）。

　　（3）复苏用新配制的培养液。