细胞冷冻步骤：

　　1、冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。

　　2、配制冷冻保存溶液(使用前配制)：将DMSO 加入新鲜培养基中，后浓度为5-10%，混合均匀，置于室温下待用。

　　3、依细胞继代培养之操作，收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。

　　4、离心，去除上清液，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。

　　细胞保存方法：

　　1、传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

　　2、程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。