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THP-1细胞传代步骤
时间:2024-01-26编辑:小编浏览:

  如果THP-1细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  

  方法一

  

  收集THP-1细胞,1000RPM条件下离心3-5min分钟,弃去上清液

  

  补加1-2ml培养液后吹匀,将THP-1细胞悬液按1:2的比例分到新的含10ml培养基的新皿中或者瓶中。

  

  方法二

  

  可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起

  

  将THP-1细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

  

  备注:第一次传代时,若培养基中有细胞碎片,则将细胞悬液装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀,按1:1分到新的装有10mL新鲜培养基的培养皿中,置于培养箱中培养。

  

  THP-1细胞冻存步骤

  

  待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面10cm皿为例;

  

  1.收集THP-1细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,加 1 mL新鲜培养基重悬细胞,进行细胞计数。

  

  2.根据THP-1细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

  

  3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。


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